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SPA酶联免疫吸附试验注意事项-【新闻】

发布时间:2021-09-13 21:00:43 阅读: 来源:三角龙骨厂家

1、目前使用的聚苯乙烯塑料板对抗体的吸附性能较好,因此对于抗原,特别是大分子(分子量>100万)的抗原应该进行一些适当的处理,如DNA,应将其事先冻融,使其变成较小分子再包被,如脂蛋白则应改变包被的温度,可在37℃包被过夜。

2、由于SPA-ELISA的敏感性极高,因此也很容易出现非特异性显色,排除非特异性显色的方法除了纯化抗原抗体外,还应该注意:

(1)抗原包被后,再以牛血清白蛋白包被一次或稀释液中加入1%的牛血清白蛋白均可,以占据未包被的一些空隙。

(2)检测血清抗体时,需事先检测大标本量的正常血清效价水平,在检测待检标本时,减去正常的血清效价。

(3)ELISA法加入标记物后往往37℃孵育2h,SPA同IgG的结合不是免疫反应,而是一种化学反应,一般认为,这种结合可能在极短的时间内发生,所以加PPA后,医学教。育网搜集整理孵育时间可以缩短到0.5h.孵育过久,反而可因为SPA本身吸附到反应板上,造成非特异性显色。

3、叠氮钠对SPA显色影响较大,所以在SPA-ELISA过程中,不宜加叠氮钠做防腐剂,在组织细胞培养固定,也不适宜用甲醛固定,而需采取甲醇或乙醇。

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